细菌的储存方法
* 来源: * 作者: * 发表时间: 2020-01-14 1:19:47 * 浏览: 5
菌株是该国重要的生物资源。鉴于其自身的遗传和变异性，如何降低细菌菌株的贮藏和运输过程中细菌的腐烂速度并防止细菌污染，如何保持细菌的遗传特性不变，并使它们成为优良的高产菌株已久以来用于生产中，已成为食用菌领域的重要课题。为了满足批量生产的需要，并满足批量生产的需要，本文介绍了几种简单，实用的优质菌株贮运方法。首先，细菌通过低温，干燥，缺氧和饥饿来贮藏和运输的基本原理达到了限制菌丝体生理代谢的极限。首先，选择优质的纯净细菌，包括菌丝体及其孢子。其次，根据它们的生理和生化特性，人为地创造诸如低温，干燥或缺氧的条件，以抑制微生物的代谢并将其生命活动降低到极限。低水平或处于休眠状态，从而延长了细菌的寿命，并保持了细菌的原始特征并防止了突变。二，试管斜角应变的贮运方法一系列贮藏方法1.低温常规移植贮运方法将需要贮藏和运输的细菌接种在适当的倾斜培养基上，并在适当的温度下培养。取出后，将其存放在3〜5°C的低温干燥场所中，或将其存放在4°C的冰箱中。每3〜6个月一次移植试管，具体应根据容器的特性确定。应变。储存和运输时，注意环境湿度不要过高，以防止霉菌通过棉塞进入管子。因此，如果使用棉塞，则可以使用干净的塑料薄膜或牛皮纸包裹棉塞，或者可以使用无菌的白色橡胶塞子并用石蜡包被，这样可以减少污染的机会并防止干燥的培养基。除草菇外，大多数食用菌均可通过这种方法进行存储和运输。 2.液体石蜡的储存和运输方法：高压灭菌后，将化学纯净的液体石蜡放入三角形瓶中，放入40°C的培养箱中，蒸发水直至石蜡油完全透明。将处理过的石蜡油转移到空白的倾斜表面上，并在28至30°C下培养2至3天，这证明它可以在不生长细菌的情况下使用。然后将母种子连接到倾斜的培养基上。菌丝体在倾斜表面上完全长大后，将液体石蜡注射到倾斜表面上，并且注射量优选比倾斜表面高1cm，从而使细菌与空气隔离并且降低了代谢能力。 。管口用无菌的白色橡胶塞塞紧，用石蜡密封，并直立存放在室内干燥的地方或存放在冰箱中。通常，它可以保存一年以上，并且在低温下可以延长保存和运输时间。使用时，从倾斜表面上取一点菌丝体，将其转移到新鲜的倾斜表面培养基中，然后进行培养。由于菌丝体受液体石蜡影响并影响其生长，因此需要再次转移菌丝以恢复正常生长。 3.白色橡胶塞的密封方法：选择与试管直径匹配的白色橡胶塞，用0.2％的煤酚皂溶液洗涤，然后将其浸泡在酒精中以备后用。试管的倾斜表面充满菌丝后，在无菌条件下取下棉塞，取一个浸透的白色橡胶塞，用火焰迅速将其插入试管口，并用石蜡密封。这种方法可以达到与石蜡油储存相似的效果。用这种方法储存的细菌可以存活1至3年，但最好每年移植一次。 4.蒸馏水的储存和运输方法将8种成熟的试管细菌放入接种箱中，注入蒸馏水，并完全浸没培养液的倾斜表面。在管口处最大2厘米。管口用白色橡胶塞紧紧密封，并用石蜡密封。它放置在室温下阴凉处，可以存储和运输大约1年。非斜面固体菌株系列保存方法1.麦麸的贮运方法将麦麸和水以0.80：1的比例充分混合后，放入高压灭菌的试管中，通过无菌测试后接种，并在适当的条件下培养至菌丝体温度。显影后，将试管放入真空干燥器中，使用真空泵排出麦麸培养基中的水分，然后将其转移到装有硅胶的干燥器中。在常温下用凡士林将其密封并保存3至5年。 。 2.谷物的贮运方法：取优质小麦，浸入20℃水中5h，洗净，干燥，放入试管中，占据试管深度的1/3，加热摇匀高压灭菌后，冷却后将其连接到菌丝。在适当的温度下培养身体，直到菌丝体充满底物，并用石蜡将棉塞密封。棉塞被放置在20°C以下的冰箱或干燥的地方，可以存储和运输1-2年。 3.木片的存储和运输方法：阔叶木片的78％，麦麸的20％，蔗糖的1％和石膏粉的1％。混合后，加水并充分混合。在试管中灭菌后，插入倾斜菌株并在适当的温度下进行培养。当菌丝体长到试管的2/3时，棉塞用石蜡密封，在低温或常温下储存和运输，通常可以储存1-2年。 4.秸秆粉末的保存秸秆蘑菇菌株秸秆蘑菇倾斜菌株在2-4°C下保存2天后会失去活力，并且由于倾斜培养基的脱水作用，在室温下保存会影响菌株的存活。用稻草粉保存稻草蘑菇菌株具有其独特的优势。配方为75％的稻草粉，22％的麦麸，1％的石膏粉，1％的碳酸钙，1％的蔗糖，以及适量的水以混合和调节湿度。在试管中高压灭菌后，照常接种和培养。当菌丝长至试管的2/3时，将嘴处的棉塞与石蜡融合在一起。在室温下保存至明年，它不会影响其活力和种类。液体系列细菌的保存方法1.生理盐水的储存和运输方法将要储存和运输的细菌放入马铃薯培养液中，将60mL培养液装入250mL三角瓶中，每天摇动或摇动5-10次，培养5-7d然后，用无菌移液管将形成的菌丝体球吸到装有5mL无菌生理盐水的试管中，并将4至5个菌丝体球转移到每个管中，并插入无菌的白色橡胶塞并用石蜡包被。贮运1-2年。 2.营养液保存方法营养液配方为20％土豆汁，2％葡萄糖，0.3％磷酸二氢钾，0.15％硫酸镁和痕量硫酸铵。每个试管含5mL。灭菌后，使用无菌移液管将在正常生理盐水储存和运输方法中深培养的4〜5个菌丝体球吸到试管中。在室温下储存于10〜25℃。它可以生存2〜3年。其保存效果优于生理盐水保存方法。不影响菌株形成子实体的能力。 3.无菌水保存方法首先将培养的倾斜细菌切成小块，将培养基转移到装有适量无菌蒸馏水的试管中，然后用白色橡胶塞密封并在室温下约20°存放。 C.可以存活1至2年。磷酸盐缓冲溶液也可以用作保存溶液，并且缓冲溶液的pH值取决于每个保存菌株的pH。该方法易于操作。用孢子保存细菌系列方法1.滤纸片的贮运方法取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸，切成4.0cm×0.8cm小纸条ps，然后将它们铺在培养皿中，然后用纸消毒包裹。通过钩子法收集孢子，使孢子落在滤纸条上。将带有孢子的滤纸条放入储运试管中，用白色橡胶塞密封，将储运试管放入干燥机中1至2天，除去滤纸水分，然后储运它在低温下。保质期可以达到2到10年。 2.沙土管的存储方法：以河沙浸泡并用水洗涤数次，通过60目筛除去粗颗粒，加入1％稀盐酸煮沸30分钟以除去有机物，然后用水冲洗直至pH值达到中性，干燥后使用。同时，取薄薄的黄土或红壤的未覆盖层，反复用水冲洗至中性，干燥并研磨，通过100目筛，将处理过的沙土与2〜4：1混合，然后分配到小试管中。每支试管装满0.5g，高压灭菌（1.5kg / cm2）3次，然后干热灭菌（160℃，2h）一次，只有通过无菌试验后才能使用。在无菌条件下，向形成孢子的腐烂细菌注入3 mL无菌水，刮擦苔藓以制备细菌悬浮液，然后用无菌吸管将细菌溶液吸入沙管中以浸湿沙子。将接种的沙管放在装有干燥剂的真空干燥剂中，然后连接真空泵抽气，直到沙子干燥为止。插入孢子后48小时内应完成真空干燥操作，以防止孢子发芽。所制备的沙土管采用石蜡密封，可以在低温下储存和运输2至10年。此外，还有甘油的储存和运输方法，分支的储存和运输方法，超低温液氮的储存和运输方法以及冷冻真空干燥方法。尽管有许多存储和运输细菌的方法，但有其优点和缺点。其中，低温常规移植的贮藏和运输方法简单易行，不需要专用设备，但每隔几个月就要转移一次。转移次数增加，突变的可能性增加，并且容易引起菌株下降。近年来，人们发现了一种目前被认为是最有效的广谱安全储运方法-超低温液氮储运方法。 ATCC使用这种方法来存储和运输双孢蘑菇。细菌种类在9年后保持稳定，目前被认为是国际上理想的细菌。细菌的储存和运输方法。然而，需要液氮储罐设备，并且液氮的来源受到限制并且成本高。只有少数科研机构可以使用它，并且不能推广。另外，有冷冻真空干燥法，通常可以保存10年以上，但是成本较高。第三，确定细菌的贮藏和运输效果的常用指标是菌株的存活率和接种物的存活率。为了准确地确定菌株在储运后是否发生了变化，有必要从以下四个方面进行观察和测量：①生物学特性，例如菌丝的形状和颜色；②分解底物的能力，例如以细菌和食物的比率为准③遗传特性，例如酶谱和相关酶的酶活性，④产生蘑菇的能力，包括产量和品质。通过经常检查以确保没有任何降解迹象的菌株获得了蘑菇种植者的信任。通过识别储运菌株的作用，可以改善储运方法，改善储运体系。
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